核酸提取分為傳統(tǒng)方法和商業(yè)化試劑抽提。傳統(tǒng)的方法一般會(huì)采用Fen/LvFang抽提及乙醇沉淀來提取核酸。
商業(yè)化試劑盒方法提取核酸中,比較經(jīng)典的是采用離心柱法,即將硅膠膜固定在離心管中,通過離心力或者負(fù)壓讓含核酸的液體通過硅膠膜,核酸被留在膜上。再經(jīng)過洗滌、洗脫等步驟得到核酸。不管是傳統(tǒng)的方法還是商業(yè)化試劑盒方法,都需要注意下面這些問題。
一、溫度
核酸是比較敏感脆弱的樣品,所以離心機(jī)的控溫性能要好,才能防止核酸降解。離心的溫度盡量維持在 4 ℃,轉(zhuǎn)子的材料也要盡量選用導(dǎo)熱性能好的材料,防止樣品溫度和設(shè)置的溫度偏差變大。
二、角度與離心力
轉(zhuǎn)子的設(shè)計(jì)角度, 45°角轉(zhuǎn)是比較合理的,便于核酸的收集,還能減少樣品的損失。離心力應(yīng)盡量大于 10,000 x g,離心力越大,離心時(shí)間越短。
其他注意點(diǎn):
● 提取核酸的試劑會(huì)有一定的腐蝕性,為了防止試劑腐蝕轉(zhuǎn)子,應(yīng)盡量選擇帶 PTFE 涂層的轉(zhuǎn)子,這種涂層耐酸、耐堿、耐各種有機(jī)溶劑。
● 在使用試劑盒抽提的時(shí)候,應(yīng)盡量選用試劑盒的 Kit 轉(zhuǎn)子,不需要剪蓋,轉(zhuǎn)子邊緣采用加寬設(shè)計(jì)可以防止打掉離心管蓋。
綜上所述,一臺(tái)搭配了 F-45-18-11-Kit型 Kit 轉(zhuǎn)子的 5424R 低溫高速離心機(jī)會(huì)是您入門級(jí)的選擇,同時(shí)又不失其專業(yè)性。
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